目的基因的获取方法与步骤（生物基因工程 总结）

基因工程的相关知识

原理：基因重组

三个工具：

1. 限制酶：能够识别特定的特定的DNA片段，切割这个片段中特定的脱氧核苷酸间的磷酸二酯键

2. DNA连接酶：Ecol DNA连接酶，其只连黏性末端；T4 DNA连接酶，其既连黏性末端又连平末端，但连平末端效率低

3. 运载体：质粒、细菌和酵母菌内灭活的病毒，入侵菌体的衍生物

4. 条件：能自我复制（具有复制原点）、具有一个或多个复制酶切位点、具有标记基因、可稳定遗传和表达

过程：

1. 获取目的基因（从基因库中获取或人工合成）

2. 基因表达载体的构建（五个元件：启动子、终止子、目的基因、标记基因、复制原点）

3. 将目的基因导入受体细胞

注释（野路子吆）：

目的基因导入受体细胞的方法：

植物：农杆菌转化法、基因枪法（用于大多数植物）、花粉管通道法（操作简单成功率低）

动物：显微注射法

微生物：感受态细胞法或钙离子的活化法

4.目的基因的检测与鉴定